01、試劑交叉污染了，怎么辦？

使用全自動(dòng)生化分析儀的過(guò)程中，我們經(jīng)常會(huì)遇到這樣的情況：?jiǎn)为?dú)做某個(gè)項(xiàng)目時(shí)結(jié)果沒(méi)有問(wèn)題，可是將它與某些項(xiàng)目組合在一起時(shí)，結(jié)果卻出現(xiàn)異常。其中的原因是全自動(dòng)生化分析儀的清洗系統(tǒng)隨著儀器使用時(shí)間的累加，清洗效果逐漸下降，試劑交叉污染的程度增加所致。

全自動(dòng)生化分析儀各試劑間的相互干擾影響到了檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，給檢驗(yàn)結(jié)果帶來(lái)很大的偏差，有時(shí)甚至?xí)`導(dǎo)臨床醫(yī)生，延誤患者的病情。

因此避免試劑間的干擾，在日常生化檢驗(yàn)工作中也就非常重要和迫切。

02、試劑間相互干擾的類(lèi)型

試劑中含有下一個(gè)檢測(cè)所要測(cè)定的底物，或是含有的某種試劑成分與下一反應(yīng)的底物有作用，因而直接干擾下一反應(yīng)的測(cè)定結(jié)果。

另一種原因是該試劑所引導(dǎo)的反應(yīng)對(duì)下一個(gè)項(xiàng)目的反應(yīng)進(jìn)程帶來(lái)間接的干擾，因?yàn)樵谟性噭┪廴镜那闆r下，下一個(gè)測(cè)試所測(cè)定的是前后兩個(gè)項(xiàng)目反應(yīng)的綜合作用結(jié)果。

03、部分已知的常用試劑間可能產(chǎn)生的相互干擾如下

①pH值改變?cè)噭┲蟹磻?yīng)緩沖液之間因儀器攜帶污染而使下一反應(yīng)的pH值改變，使下一反應(yīng)達(dá)不到最佳狀態(tài)。

如雙縮脲法測(cè)血清總蛋白，若其他條件相同，反應(yīng)在堿性(pH值8~9)條件時(shí)，蛋白肽鍵（—CONH）才都能與堿性銅溶液作用生成紫色反應(yīng)，完全測(cè)出血清蛋白的總量。

若pH＜8時(shí)，總蛋白測(cè)定結(jié)果偏低，直接影響球蛋白、白蛋白/球蛋白的結(jié)果。酶活力測(cè)定在最適pH值時(shí)，反應(yīng)最快，靈敏度最高，但是因?yàn)榫彌_能力有限，可因攜帶污染使酶促反應(yīng)出現(xiàn)無(wú)效值。

大多數(shù)酶反應(yīng)pH值在6.0~7.5之間；ALP、γ-GT、LDH須在堿性條件下最適宜。

②TG、T-CH、UA、MG試劑中含有膽酸鹽，對(duì)循環(huán)酶法測(cè)定膽汁酸能產(chǎn)生嚴(yán)重干擾。

③ALT（IFCC）、AST（IFCC）試劑中含有高活力LD成分，有可能會(huì)對(duì)LD的測(cè)定帶來(lái)干擾。

④CK（NAC-activated）、CK-MB（NAC-activated）試劑中含有Glu成分，其分析方法的原理中包含Glu的已糖激酶(HK)反應(yīng)過(guò)程，因此可能對(duì)Glu測(cè)定帶來(lái)干擾，尤其對(duì)Glu的HK法測(cè)定可能帶來(lái)嚴(yán)重干擾。

⑤Glu(HK)、CK（NAC-activated）、CK-MB（NAC-activated）、TG、HDL-C、LDL-C(直接法)等試劑中使用了鎂鹽，可能會(huì)對(duì)其后的Mg2+測(cè)定帶來(lái)干擾；TP試劑中高濃度的Cu2+對(duì)Mg2+測(cè)定也會(huì)產(chǎn)生干擾。

⑥ALT、AST、LDH、CK、CK-MB、UA、r-GT、TP，LDH等試劑由于試劑中含有K+，與K+的酶法測(cè)定有相同或相反的進(jìn)程，對(duì)K+的酶法測(cè)定產(chǎn)生干擾。

⑦ChE(Butyrylthiocholine)、TC(ChOD-PAP)、Glu(GOD-PAP)、UA(Uricase)、α-HBDH(DGKC)等試劑使用磷酸緩沖液，可能會(huì)對(duì)無(wú)機(jī)磷的測(cè)定帶來(lái)干擾。

⑧Mg2+試劑(Calmagite)中含有EGTA成分，為Ca2+絡(luò)合劑，可能對(duì)Ca2+的測(cè)定帶來(lái)干擾。

⑨CK檢測(cè)不應(yīng)在ALP、Ca檢測(cè)之前，因CK反應(yīng)液中加入EDTA-Na，能抑制ALP活性，結(jié)合Ca而使結(jié)果偏低。

⑩BUN酶法測(cè)定因谷氨酸脫氫酶（GLDH）消耗NADH，不能放在底物NADH如ALT、AST項(xiàng)目前檢測(cè)。

04、干擾的排查和發(fā)現(xiàn)

事實(shí)上各個(gè)廠家所提供的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)常不能夠全面反映試劑組成的情況，而生化反應(yīng)的影響因素又是相當(dāng)復(fù)雜的。

因此，通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)試劑交叉污染可能帶來(lái)的干擾顯得更加重要。

具體可以通過(guò)以下幾個(gè)試驗(yàn)來(lái)排查和發(fā)現(xiàn)試劑間可能發(fā)生的干擾：

1.將某一試劑作為樣本進(jìn)行全套項(xiàng)目測(cè)定，考察結(jié)果的情況，進(jìn)而確定發(fā)生試劑交叉污染時(shí)造成直接干擾的項(xiàng)目；雙試劑的R1、R2兩種都要做，這樣在解決干擾時(shí)有針對(duì)性。

2.1份樣本分為兩份，一份加生理鹽水或其他適當(dāng)?shù)南♂屢?，另一份加等量的試劑，同時(shí)測(cè)定、考察結(jié)果的變化，進(jìn)而確定可能發(fā)生試劑交叉污染時(shí)造成干擾的項(xiàng)目。

3.懷疑Ａ項(xiàng)試劑對(duì)Ｂ項(xiàng)目存在干擾，可以用樣本先單做Ｂ項(xiàng)目若干次；然后先做Ａ項(xiàng)目，接著做Ｂ項(xiàng)目若干次。通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，可以知道Ａ試劑通過(guò)試劑針對(duì)Ｂ項(xiàng)目的干擾程度。

05、干擾的消除

通過(guò)以上常見(jiàn)試劑間相互干擾的原因的分析及試劑干擾的排查的試驗(yàn)，應(yīng)可以有針對(duì)性采取一些措施消除試劑間的干擾，常用的方法有下面幾種：

1.為減少試劑間的相互干擾，應(yīng)定期對(duì)儀器進(jìn)行適當(dāng)?shù)谋ｐB(yǎng)，如更換管道，用去污劑、酸性洗液清洗比色杯，用去污劑擦清試劑針，用苯甲醇擦洗攪拌棒等。

2.合理安排檢測(cè)項(xiàng)目的順序：一般在安排項(xiàng)目順序時(shí)要求兩個(gè)項(xiàng)目間至少要有一個(gè)非干擾項(xiàng)目，而最徹底的做法則是將被干擾項(xiàng)目置于干擾項(xiàng)目之前，以消除干擾發(fā)生的可能。

同時(shí)要求檢驗(yàn)人員對(duì)儀器的工作狀態(tài)要了如指掌，并在一個(gè)樣本的項(xiàng)目選擇或一個(gè)樣本的最后一項(xiàng)與下一樣本的第一個(gè)項(xiàng)目選擇時(shí)對(duì)于試劑交叉污染的可能性加以考慮，合理安排項(xiàng)目順序，以便得到更為合理的結(jié)果。

對(duì)常見(jiàn)的生化項(xiàng)目可以按以下順序安排檢測(cè)：

P、Alb、DBIL、TBIL、K、Ca、CK、TBA、TG、AFU、ALT、CK-MB、APOA1、T-CH、APOB、Cl、HDL-C、LP（a）、AST、GPDA、AMY、LDL-C、BUN、UA、CHE、ADA、r-GT、Mg、Na、ALP、LDH、GPDA、TP、Cr。

3.一些生化分析儀還有額外的沖洗功能，可以在被干擾項(xiàng)目檢測(cè)前對(duì)試劑針，比色杯用酸性洗液、堿性洗液進(jìn)行2次或多次沖洗，以減少項(xiàng)目間的交叉污染。

4.有的全自動(dòng)化分析儀器有不同的通道，可以將有干擾的項(xiàng)目排在不同的通道中檢測(cè)。

5.選用具有抗交叉污染的試劑盒：如在游離膽固醇試劑中添加膽固醇酯抑制劑，以減少膽固醇酯酶水解膽固醇酯引起對(duì)游離膽固醇測(cè)定的污染。

通過(guò)以上幾種方法，大部分試劑間的交叉污染能夠被解決，實(shí)際工作中，用全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行連續(xù)的多個(gè)項(xiàng)目的測(cè)定，每個(gè)反應(yīng)的詳細(xì)過(guò)程難以探知。

要求我們?cè)趯?shí)際工作中必須對(duì)生化分析儀的工作原理，方法，流程，狀態(tài)非常了解，還須對(duì)試劑的組成，反應(yīng)原理作深入的分析，理論分析結(jié)合實(shí)際應(yīng)用，方可以摸索出一套符合本單位工作的方法。

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